L’Assemblée législative fait l’acquisition du terrain du collège King’s en 1854, où se trouve actuellement Queen’s Park, en vue de possiblement y établir le futur Parlement du Canada. En 1857, lorsque la reine Victoria jette son dévolu sur Ottawa pour la capitale nationale, le gouvernement convertit temporairement les installations en asile.

Le 11 septembre, le prince de Galles et fils aîné de la reine Victoria, Édouard, le futur roi Édouard VII, inaugure Queen’s Park - emplacement futur de l'Assemblée législative de l'Ontario - en tant que parc municipal public à Toronto. 

En septembre 1864, des délégués de la Province du Canada se rendent à l’Île-du-Prince-Édouard dans le cadre de la Conférence de Charlottetown pour discuter avec leurs homologues des provinces maritimes dans le but de s’unir pour former un nouveau pays. La Grande-Bretagne a soutenu la Confédération comme moyen de réduire le fardeau des colonies sur le Trésor britannique, tandis que de nombreux délégués y ont vu un moyen de se protéger contre l’agression des États-Unis. John A. Macdonald, George Brown et George-Étienne Cartier sont du lot.

Les délégués de la Province du Canada et des provinces maritimes se rencontrent de nouveau, cette fois à Québec, pour discuter de la structure d’un futur pays à la suite de l’unification des régions. La Conférence donne lieu à 72 résolutions qui serviraient pour la base d'une constitution canadienne.

Au terme d’une troisième conférence, à Londres, en Angleterre, le Parlement britannique adopte l’Acte de l’Amérique du Nord britannique en mars. L’Acte unifie les colonies de la Province du Canada (maintenant deux provinces distinctes : l’Ontario et le Québec), le Nouveau-Brunswick et la Nouvelle-Écosse. En vigueur le 1er juillet, l'un de ses importants créateurs - John A. Macdonald (1815-1891) - est devenu le premier Premier ministre du pays.

John A. Macdonald nomme le premier premier ministre de l’Ontario, John Sandfield Macdonald (avec qui il n’a aucun lien de parenté). Sandfield Macdonald remporte les premières élections provinciales, en septembre 1867, et dirige un gouvernement mixte composé d’élus libéraux et conservateurs. 

À la suite de la démission d’Edward Blake, Oliver Mowat est assermenté comme premier ministre de l’Ontario. Fort de son expérience en tant qu’avocat et de sa renommée en tant que Père de la Confédération, il instaure nombre de réformes qui façonnent la province, par exemple des programmes d’indemnisation des accidents du travail et d’aide à l’enfance. Avec 24 ans de service à son actif, il est le premier ministre étant resté le plus longtemps en poste.

En usage de 1868 à 1912, «Government House» était la résidence officielle des lieutenants-gouverneurs de l'Ontario - le représentant de la couronne dans la province. Située au centre-ville de Toronto au coin de rue de Simcoe et King, elle était implantée à une courte distance de l'édifice législatif, ainsi situé sur la rue Front.